中国矫形外科杂志

2011, v.19;No.269(03) 228-232

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恒河猴骨髓间充质干细胞体外培养及诱导分化成骨细胞的实验研究
Experimental study on of Rhesus monkey MSCs cultivation and differentiation into osteoblasts in vitro

闵少雄;李森;刘成龙;朱立新;曹延林;靳安民;

摘要(Abstract):

[目的]体外分离培养非人类灵长类动物恒河猴骨髓MSCs,研究其生长、扩增及诱导分化为成骨细胞的特性。[方法]梯度离心法分离、纯化恒河猴骨髓源MSCs,观察不同接种密度和换液时间对细胞生长的影响;在体外应用成骨添加剂(含地塞米松10-7mol/L、β-甘油磷酸钠10 mmol/L、维生素C 50 mg/L)或rhBMP-2(100 ng/L)定向诱导分化,对分化后的细胞进行免疫组化染色和ALP、BGP定量测定以鉴定成骨细胞,并比较两种定向诱导分化方法的效果。[结果]梯度离心法分离、纯化得到的恒河猴骨髓源MSCs具有分裂和克隆增殖的能力,种植细胞密度为10×104~30×104/cm2,48 h后半量换液,以后每3 d全量换液的方法较合理,MSCs能少量表达ALP活性,分泌的钙量较少;诱导分化后的细胞具有和体内成骨细胞相同的形态学特征,ALP染色阳性,能表达Ⅰ型胶原,不表达Ⅱ型胶原,细胞融合后3 d,ALP和BGP分泌明显增加,融合后14 d细胞ALP、BGP的分泌水平略有升高,但无明显增加;采用成骨添加剂和rhBMP-2诱导分化MSCs后相同时期成骨细胞ALP活性、BGP含量无明显差异。[结论]密度梯度离心法分离得到的非人类灵长类动物骨髓源MSCs,体外培养具有分裂、克隆增殖的能力,在加有成骨细胞诱导剂或rhBMP-2的培养基里能诱导分化为成骨细胞,化学药物在定向诱导分化过程中具有和生长因子相一致的作用。

关键词(KeyWords): 恒河猴骨髓间充质干细胞;体外培养;诱导分化;成骨细胞

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 广东省科技计划项目(编号:2010B080701019)

作者(Author): 闵少雄;李森;刘成龙;朱立新;曹延林;靳安民;

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DOI:

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