赵庆华;田纪伟;王雷;董双海;王震;刘诚袆;

• 1:上海交通大学附属第一人民医院骨科

摘要(Abstract)：

[目的]构建靶向COX-2基因的microRNA真核表达载体,评估其转染人喉癌细胞株Hep-2细胞后对COX-2基因的干扰效果。[方法]根据COX-2 mRNA序列设计合成4对microRNA片段,定向克隆到pcDNA6.2GW/EmGFPmiR真核表达载体上,采用测序分析鉴定插入序列的完整性;并将其转染至Hep-2细胞株中。采用实时荧光定量PCR检测其对COX-2基因表达的干扰效果以得到最佳干预效果的RNAi片段。[结果]构建的4组重组体插入片段的碱基序列完全正确。4组microRNA片段对Hep-2细胞中COX-2基因mRNA表达水平均有下降。其中COX-2 mi-1组的表达水平最低。[结论]从构建的4组COX-2 microRNA重组体中成功的筛选出最佳干扰靶点质粒,即COX-2 mi-1组,为应用microRNA靶向COX-2的基因治疗的研究奠定了基础。

关键词(KeyWords)： 环氧化酶;软骨;microRNA;RNA;小分子干扰

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 上海市卫生局青年项目(编号:2009-37);; 上海交通大学医学院自然科学基金项目(编号:09XJ21048)

作者(Author): 赵庆华;田纪伟;王雷;董双海;王震;刘诚袆;

Email:

DOI:

参考文献(References)：

• [1]Ross JS,Carlson JA,Brock G.miRNA:the new gene silencer[J].AmJ Clin Pathol,2007,5:830-836.
• [2]Mastbergen SC,Lafeber FP,Bijlsma JW.Selective COX-2 inhibitionprevents proinflammatory cytokine induced cartilage damage[J].Rheumatology(Oxford),2002,41:801-808.
• [3]He H,Jazdzewskok,Li W,et al.The role of microRNA genes in papillarythyroid carcinoma[J].Proc Natl Acad Sci USA,2005,52:19075-19080.
• [4]Zeng Y.Priciples of micro RNA production and maturation[J].Onco-gene,2006,46:6156-6162.
• [5]Frondoza CG,Sohrabi A,Polotsky A,et al.An in vitro screening assayfor inhibitors of proinflammatory mediators in herbal extracts using hu-man synoviocyte cultures[J].In Vitro Cell Dev Biol Anim,2004,40:95-101.
• [6]Yamada R,Sano H,Timothy H,et al.Selective inhibition of cyclooxy-genase-2 with antisense oligodeoxynucleotide restricts induction of ratadjuvant-induced arthritis[J].Biochem Biophys Res Commun,2000,269:415-421.
• [7]Jeffrey JE,Aspden RM.Cyclooxygenase inhibition lowers prostaglandinE2 release from articular cartilage and reduces apoptosis but not pro-teoglycan degradation following an impact load in vitro[J].ArthritisRes Ther,2007,9:129.
• [8]Mastbergen SC,Bijlsma JW,Lafeber FP.Selective COX-2 inhibition isfavorable to human early and late-stage osteoarthritic cartilage:a hu-man in vitro study[J].Osteoarthritis Cartilage,2005,13:519-526.
• [9]胡伟华,陈安民,郭风劲,等.Sox9基因真核表达载体的构建及其诱导大鼠骨髓基质细胞定向分化为骨骺干细胞[J].中国矫形外科杂志,2009,17:1245-1248.