中国矫形外科杂志

2014, v.22;No.360(22) 2089-2094

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壳聚糖酶基因在软骨细胞中的表达及对壳聚糖介导基因转染的影响
Expression of chitosanase gene in chondrocytes and its role in the efficiency of transfection of chondrocytes by CS/DNA nanoparticles in vitro

连礼熠;卢华定;陈明伟;

摘要(Abstract):

[目的]探讨携带壳聚糖酶(CSN)基因的重组慢病毒感染软骨细胞后影响CSN活性的因素,及CSN在壳聚糖(CS)/DNA纳米粒介导基因转染软骨细胞中的作用。[方法]构建携带CSN和红色荧光带白(RFP)基因的重组慢病毒(LV-CSN)并感染兔关节软骨细胞,流式细胞仪及荧光显微镜检测其感染率;二硝基水杨酸比色法(DNS)检测对CSN活性的影响因素;以CS/DNA纳米粒介导体外基因转染软骨细胞,检测CSN对CS/DNA纳米粒介导基因转染软骨细胞的作用。[结果]带RFP基因的LV-CSN感染软骨细胞后48 h和第7 d,RFP表达率分别为(91.40±0.98)%和(91.67±1.00)%,二者差异无统计学意义(P=0.583)。p H值、温度及铜离子浓度对CSN的活性有明显影响。LV-CSN感染软骨细胞后CS/DNA组的基因转染效率显著高于裸p DNA组和CS/DNA组(P<0.05),但铜离子可以拮抗这种作用。[结论]在一定时间内LV-CSN感染软骨细胞后可稳定表达CSN,CSN的活性受p H值、温度及铜离子浓度的影响;CSN可提高CS/DNA对软骨细胞的基因转染效率,铜离子则可拮抗这种作用。

关键词(KeyWords): 壳聚糖酶;壳聚糖;非病毒基因载体;基因转染;软骨细胞

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金资助项目(编号:81272040);; 广东省自然科学基金资助项目(编号:S2011010004808,S2013010016385);; 广东省科技计划基金资助项目(编号:2012B031800451)

作者(Author): 连礼熠;卢华定;陈明伟;

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