连礼熠;卢华定;陈明伟;

• 1:中山大学附属第三医院骨科

摘要(Abstract)：

[目的]探讨携带壳聚糖酶(CSN)基因的重组慢病毒感染软骨细胞后影响CSN活性的因素,及CSN在壳聚糖(CS)/DNA纳米粒介导基因转染软骨细胞中的作用。[方法]构建携带CSN和红色荧光带白(RFP)基因的重组慢病毒(LV-CSN)并感染兔关节软骨细胞,流式细胞仪及荧光显微镜检测其感染率;二硝基水杨酸比色法(DNS)检测对CSN活性的影响因素;以CS/DNA纳米粒介导体外基因转染软骨细胞,检测CSN对CS/DNA纳米粒介导基因转染软骨细胞的作用。[结果]带RFP基因的LV-CSN感染软骨细胞后48 h和第7 d,RFP表达率分别为(91.40±0.98)%和(91.67±1.00)%,二者差异无统计学意义(P=0.583)。p H值、温度及铜离子浓度对CSN的活性有明显影响。LV-CSN感染软骨细胞后CS/DNA组的基因转染效率显著高于裸p DNA组和CS/DNA组(P<0.05),但铜离子可以拮抗这种作用。[结论]在一定时间内LV-CSN感染软骨细胞后可稳定表达CSN,CSN的活性受p H值、温度及铜离子浓度的影响;CSN可提高CS/DNA对软骨细胞的基因转染效率,铜离子则可拮抗这种作用。

关键词(KeyWords)： 壳聚糖酶;壳聚糖;非病毒基因载体;基因转染;软骨细胞

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金资助项目(编号:81272040);; 广东省自然科学基金资助项目(编号:S2011010004808,S2013010016385);; 广东省科技计划基金资助项目(编号:2012B031800451)

作者(Author): 连礼熠;卢华定;陈明伟;

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DOI:

参考文献(References)：

• [1]Pathak A,Patnaik S,Gupta KC.Recent trends in non-viral vectormediated gene delivery[J].Biotechnol J,2009,11:1559-1572.
• [2]Rekha MR,Sharma CP.Polymers for gene delivery:current status and future perspectives[J].Recent Pat DNA Gene Seq,2012,6:98-107.
• [3]Eide KB,Norberg AL,Heggset EB,et al.Human chitotriosidasecatalyzed hydrolysis of chitosan[J].Biochemistry,2012,51:487-495.
• [4]覃昱.甲壳素与组织工程[J].中国矫形外科杂志,2002,10:63-65.
• [5]吕璐璐,卢华定,陆慧琼,等.透明质酸/壳聚糖/p EGFP纳米粒介导体外基因转染关节软骨细胞与滑膜细胞的比较[J].中国矫形外科杂志,2012,11:1034-1039.
• [6]Sun Y,Zhang J,Wu S,et al.Preparation of D-glucosamine by hydrolysis of chitosan with chitosanase and beta-D-glucosaminidase[J].Int J Biol Macromol,2013,61:160-163.
• [7]Alatorre-Meda M,Taboada P,Hartl F,et al.The influence of chitosan valence on the complexation and transfection of DNA:the weaker the DNA-chitosan binding the higher the transfection efficiency[J].Colloids Surf B Biointerfaces,2011,82:54-62.
• [8]Colomer-Pallas A,Pereira Y,Petit-Glatron MF,et al.Calcium triggers the refolding of bacillus subtilis chitosanase[J].Biochem J,2003,369:731-738.