人嗅鞘细胞与骨髓间充质干细胞体外共培养的实验研究Co-culture of olfactory ensheathing cells and bone marrow mesenchymal stem cells in vitro
史玉朋;沈慧勇;叶俊强;吴燕峰;唐勇;曹瑞治;林绵辉;王磊;李国松;
摘要(Abstract)：
[目的]通过体外共培养观察人嗅鞘细胞(OECs)对骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖分化的影响。[方法]取5个月以上引产胎儿嗅球及骨髓,分离培养及鉴定OECs及MSCs,携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的腺相关病毒转染标记0ECs,双苯亚甲胺荧光染料标记MSCs,将两种细胞按1:1比例进行共培养,MSCs单独培养组为阴性对照组,免疫细胞化学方法检测MSCs表达巢蛋白(nestin)、神经元特异性核蛋白(NeuN)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF-M)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)情况。[结果]MOI值为1×106时0ECs表达GFP阳性率为84.89%,对细胞生长活性无明显影响。共培养时两种细胞生长良好,共培养7 d未见形态学改变,经复方丹参注射液诱导后部分MSCs呈现神经元样改变,表达nestin、NSE、NeuN、NF-M、GFAP特异性标志,且共培养组的分化率明显高于单独MSCs培养组,有显著性差异。[结论]OECs可通过分泌可溶性物质及细胞之间的相互作用启动MSCs分化程序,提高MSCs向神经细胞分化率。
关键词(KeyWords)： 嗅鞘细胞;骨髓间充质干细胞;绿色荧光蛋白;共培养
基金项目(Foundation): 广东省科技计划项目(编号:2004A30201002)
作者(Author): 史玉朋;沈慧勇;叶俊强;吴燕峰;唐勇;曹瑞治;林绵辉;王磊;李国松;
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DOI:
参考文献(References)：
- [1]Su Z,He C.Olfactory ensheathing cells:biology in neural develop-ment and regeneration[J].Proq Neurobiol,2010,4:517-532.
- [2]Rankin S.Mesenchymal stem cells[J].Thorax,2012,6:565-566.
- [3]冯林杰,罗卓荆,王晓礽,等.嗅鞘细胞条件培养液对骨髓基质干细胞的诱导分化作用研究[J].中国矫形外科杂志,2006,24:1894-1895.
- [4]朱文标,邓宇斌,毕小彬,等.骨髓间质干细胞与胚胎嗅鞘细胞联合移植治疗大鼠脊髓损伤的实验研究[J].中国脊柱脊髓杂志,2006,12:932-936.
- [5]沈慧勇,王学文,唐勇,等.人胚胎嗅鞘细胞植入鼠半横断脊髓对脊髓轴突再生的影响[J].中国临床康复,2004,35:7986-7987.
- [6]袁绍辉,尚剑,邵国军,等.重组BMP4/7融合基因腺相关病毒的构建及其对兔骨髓基质干细胞生物学行为的影响[J].中国矫形外科杂志,2008,20:1568-1572.
- [7]Xiao PJ,Lentz TB,Samulski RJ.Recombinant adeno-associated vi-rus:clinical application and development as a gene-therapy vector[J].Ther Deliv,2012,7:835-856.
- [8]Sarra GM,Stephens C,de Alwis M,et al.Gene replacement therapyin the retinal degeneration slow(rds)mouse:the effect on retinaldegeneration following partial transduction of the retina[J].Hum MolGenet,2001,21:2353-2361.
- [9]Weinberg MS,Samulski RJ,McCown TJ.Adeno-associated virus(AAV)gene therapy for neurological disease[J].Neuropharmacol-ogy,2012,7:1-7.
- [10]Chalfie M,Tu Y,Euskirchen G,et al.Green fluorescent protein as amarker for gene expression[J].Science,1994,5148:802-805.
- [11]胡琳燕,余加林,李芳,等.丹参诱导骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞的突触功能研究[J].第三军医大学学报,2009,2:144-147.
- [12]冯学永,马廉,杨立业,等.丹参诱导人骨髓间充质细胞体外向神经细胞分化的研究[J].医学研究生学报,2005,9:861-862.
- [13]Wewetzer K,Verdu E,Angelov DN,et al.Olfactory ensheathing gliaand Schwann cells:two of a kind[J].Cell Tissue Res,2002,3:337-345.
- [14]Serruys PW,Regar E,Carter AJ,et al.Rapamycin eluting stent:theonset of new era in international cardiology[J].Heart,2002,4:305-307.
- [15]Uccelli A,Moretta L,Pistoia V.Mesenchymal stem cells in health anddisease[J].Nat Rev Immunol,2008,9:726-736.