梁求真;折胜利;宋兴华;呼西旦;毕晓娟;罗兰;马艳;蒋岳华;白晶晶;胡玉;

• 1:新疆医科大学第一附属医院骨科中心

摘要(Abstract)：

[目的]基于兔脂肪干细胞(rabbit adipose-derived stem cells,rADSCs)、利福喷丁聚乳酸微球、同种异体部分脱钙骨支架,初步于体外构建抗结核性骨组织工程复合体。[方法]分离、培养rADSCs,经检测细胞周期、表面抗原CD44及分化诱导鉴定干细胞特性。用利福喷丁生长液干预rADSCs,按浓度分为0μg/ml、20μg/ml、40μg/ml及60μg/ml四组,分别绘制细胞生长曲线、检测细胞凋亡及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)含量。制备利福喷丁微球,计算平均直径、载药率及包封率。构建rADSCs-利福喷丁微球二维复合物并成骨诱导。制备骨支架并构建rADSCs-利福喷丁微球-骨支架三维复合物,计算细胞粘附率;扫描电子显微镜及苏木精-伊红(HE)染色观察复合情况;每3 d更换生长液,检测体外释药特性。[结果]rADSCs呈长梭形生长,G0/G1期占(80.3±3.2)%,表面抗原CD44阳性表达。成骨诱导后ALP、茜素红染色,成脂诱导后油红O染色及成软骨诱导后阿利新蓝染色均为阳性。生长曲线示60μg/ml组第4~12 d增殖能力较其他三组弱(P<0.01);凋亡检测示60μg/mL组凋亡率高于其他三组(P<0.01);ALP检测示第7、14 d 60μg/ml组ALP含量较其他三组少(P<0.05);临界浓度为40μg/ml。微球平均直径为(26.4±3.6)μm,载药率为(40.89±0.63)%,包封率为(75.24±0.18)%。二维复合物成骨诱导后茜素红染色阳性。三维复合物细胞粘附率为(96.94±1.24)%;扫描电镜及HE染色观察复合体相容性良好;体外培养第3、6、39 d累积释药量分别达总量的8.54%、20.12%及93.66%,每个时间点检测的释药浓度均低于临界浓度,但高于最低抑菌浓度。[结论]体外构建的抗结核性骨组织工程复合体具有持续缓慢释放药物的性质,且该释药浓度不影响rADSCs的增殖及成骨活性。

关键词(KeyWords)： 骨结核;脂肪干细胞;利福喷丁;骨组织工程

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金资助项目(编号:81360283)

作者(Author): 梁求真;折胜利;宋兴华;呼西旦;毕晓娟;罗兰;马艳;蒋岳华;白晶晶;胡玉;

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DOI:

参考文献(References)：

• [1]Golden MP,Vikram HR.Extrapulmonary tuberculosis:an overview[J].Am Fam Physician,2005,9:1761-1768.
• [2]Soares do Brito J,Batista N,Tirado A,et al.Surgical treatment of spinal tuberculosis:an orthopedic service experience[J].Acta Med Port,2013,4:349-356.
• [3]叶向阳,孙湘,贾会文,等.利福平/聚乳酸-聚羟基乙酸缓释微球的制备及特性[J].中国组织工程研究与临床康复,2011,51:9608-9612.
• [4]刘江涛,王永清,夏侃,等.异烟肼聚乳酸缓释体的制备及体内外释药特性[J].中国脊柱脊髓杂志,2008,4:290-293.
• [5]折胜利,罗兰,吕顺忠,等.利福喷丁的溶解性与稳定性考察[J].中国药房,2012,17:1556-1558.
• [6]Strioga M,Viswanathan S,Darinskas A,et al.Same or not the same?Comparison of adipose tissue-derived versus bone marrow-derived mesenchymal stem and stromal cells[J].Stem Cells Dev,2012,14:2724-2752.
• [7]孙玺淳,巩凡,牛东生,等.脂肪间充质干细胞结合透明质酸钠对兔骨性关节炎治疗的实验研究[J].中国矫形外科杂志,2013,19:1991-1997.
• [8]刘正文,呼西旦,付明花,等.兔脊柱结核模型的构建[J].中华实验外科杂志,2012,4:758-761.
• [9]Dooley K,Bliven E,Weiner M,et al.Safety and pharmacokinetics of escalating daily doses of the antituberculosis drug rifapentine in healthy volunteers[J].Clin Pharmacol Ther,2012,5:881-888.
• [10]王丹,姜航航.聚乳酸共聚物复合缓释药物的材料特征与实验应用[J].中国组织工程研究,2013,8:1473-1480.
• [11]Hou T,Xu J,Li Q,et al.In vitro evaluation of a fibrin gel antibiotic delivery system containing mesenchymal stem cells and vancomycin alginate beads for treating bone infections and facilitating bone formation[J].Tissue Eng Part A,2008,7:1173-1182.
• [12]Kim YK,Lee JY,Kim SG,et al.Guided bone regeneration using demineralized allogenic bone matrix with calcium sulfate:case series[J].J Adv Prosthodont,2013,2:167-171.
• [13]Hoveizi E,Nabiuni M,Parivar K,et al.Functionalisation and surface modification of electrospun polylactic acid scaffold for tissue engineering[J].Cell Biol Int,2014,1:41-29.