人髂骨生长板软骨细胞的体外培养及鉴定Culture and identification of chondrocytes from human iliac growth-plate in vitro
黄爱兵;邱勇;孙光权;李海波;殷刚;曹兴兵;钱邦平;朱泽章;朱峰;
摘要(Abstract)：
[目的]探讨人髂骨生长板软骨细胞体外培养的可行性并观察其生物学特征。[方法]对手术中获得的10例青少年特发性脊柱侧凸患者髂骨生长板软骨行体外分离、培养,观察细胞形态,MTT法测定细胞增殖,Ⅱ型胶原免疫组化染色,采用逆转录聚合酶链反应检测各代细胞Ⅱ型胶原mRNA的表达水平。[结果](1)体外培养的软骨细胞随着传代次数的增加,细胞形态由原代的多角形逐渐变为长梭形;(2)MTT比色法检测显示,第2代髂软骨细胞的生长曲线近似倒"S"形,在第4～8d细胞呈对数生长,在9～10d达平台期,至第11d开始出现生长抑制。(3)第2代细胞Ⅱ型胶原免疫组化呈强阳性。(4)Ⅱ型胶原mRNA表达水平从第2代后随着传代次数的增加逐渐下降。[结论]采用联合酶序贯消化法将软骨细胞悬液和软骨块共同体外培养髂软骨细胞简单、有效,P2代细胞很好的保持了软骨细胞的特性,可以作为种子细胞来源。
关键词(KeyWords)： 软骨细胞;单层培养;生物学特性;脊柱侧凸
基金项目(Foundation): 江苏省卫生厅重点资助项目(项目编号:k200610)
作者(Author): 黄爱兵;邱勇;孙光权;李海波;殷刚;曹兴兵;钱邦平;朱泽章;朱峰;
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参考文献(References)：
- [1]Guerne PA,Blanco F,Kaelin A,et al.Growth factor responsiveness of human articular chondrocytes in aging and development[J].Arthritis Rheum,1995,38:960-968.
- [2]张艳,柴岗,崔磊,等.不同类型人软骨细胞体外生物学特性比较[J].中华实验外科杂志,2003,20:497-498.
- [3]Isogai N,Kusuhara H,Ikada Y,et al.Comparison of different chon-drocytes for use in tissue engineering of cartilage model structures[J].Tissue Eng,2006,12:691-703.
- [4]靳小兵,罗卓荆,杨柳,等.人胚肋软骨静止区细胞的体外培养及生物学特性研究[J].中国矫形外科杂志,2004,12:57-59.
- [5]张英,周广东,崔磊,等.体外培养人胎儿软骨细胞的生物学特性[J].上海第二医科大学学报,2004,4:258-261.
- [6]Ng LJ,Wheatley S,Muscat GE,et al.SOX9binds DNA,activates transcription,and coexpresses with type II collagen during chondro-genesis in the mouse[J].Dev Biol,1997,183:108-121.
- [7]孙鹏,王拥军,施杞.大鼠不同部位软骨细胞的形态及表型特征比较研究[J].中国矫形外科杂志,2004,12:680-682.
- [8]Minas T.Autologous chondrocyte implantation for focal chondral de-fects of the knee[J].Clin Orthop,2001,391:349-361.
- [9]Ylikoski M.Height of girls with adolescent idiopathic scoliosis[J].Eur Spine J,2003,12:288-291.
- [10]Zhu F,Qiu Y,Yeung HY,et al.Histomorphometric study of the spi-nal growth plates in idiopathic scoliosis and congenital scoliosis[J].Pediatr Int,2006,48:591-598.
- [11]Moreau A,Wang DS,Forget S.Melatonin signaling dysfunction in adolescent idiopathic scoliosis[J].Spine,2004,29:1772-1781.