应用荧光蛋白标记技术对体外构建组织工程软骨的监测Application of labelled MSCs with fluorescent protein to monitor the process of construction tissue-engineering cartilage in vitro
段小军,周跃,杨柳,何天佐,戴刚,陈光兴,李忠
摘要(Abstract):
目的: 应用荧光蛋白标记细胞的技术, 对组织工程软骨体外构建过程进行活细胞的实时示踪。方法: 采用逆转录病毒载体pLEGFP N1对人间充质干细胞进行荧光蛋白标记, 以同期培养未标记细胞为对照组, 体外构建细胞 材料复合体, 通过倒置荧光显微镜和扫描电镜观测种子细胞在支架材料内的分布与数量, 并对培养 7d的两组复合体进行细胞数量比较。结果: 逆转录病毒载体pLEGFP N1成功标记间充质干细胞, 并应用于工程化组织体外构建的示踪; 第 7d标记组细胞数 (3. 4±0. 1)×106 /个复合体, 未标记组细胞数 (3. 6±0. 1)×106 /个复合体, 两组数据无统计学差异(P=0. 339)。结论: 采用逆转录病毒介导方式对种子细胞进行荧光蛋白标记, 不影响细胞在材料内的增殖, 对体外构建组织工程软骨具有良好的示踪作用。
关键词(KeyWords): 间充质干细胞;组织工程;荧光蛋白
基金项目(Foundation): 国家自然科学基金资助项目 (编号 30270375;30300079);; 全军十五医药卫生科研重点基金资助项目 (编号01Z072)
作者(Author): 段小军,周跃,杨柳,何天佐,戴刚,陈光兴,李忠
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DOI:
参考文献(References):
- [1] OchiM,UchioY,KawasakiK,etal.Transplantationofcartilage liketissuemadebytissueengineeringinthetreatmentofcartilagedefectsoftheknee[J].JBoneJointSurgBr,2002,84(4):571~578.
- [2] GarfeinES,OrgillDP,PribazJJ.Clinicalapplicationsoftissueen gineeredconstructs[J].ClinPlastSurg,2003,30(4):485~498.
- [3] 段小军,周跃,杨柳,等.传代种植密度对人间充质干细胞增殖及成骨分化的影响[J].中国矫形外科杂志,2004,12(10):756~758.
- [4] 萨姆布鲁克,拉塞尔.分子克隆实验指南[M].第3版.北京:科学出版社,2002,27~99.
- [5] 段小军,杨柳,周跃,等.不同荧光蛋白标记技术对兔骨髓基质干细胞体外增殖的影响[J].中华创伤骨科杂志,2004,6(7):731~734.
- [6] 戴刚,石宗利,李起鸿,等.新型骨与软骨组织工程支架材料制备及其性能研究[J].第三军医大学学报2002,24(5):502~505.
- [7]WakitaniS,ImotoK,YamamotoT,etal,Humanautologouscultureexpandedbonemarrowmesenchymalcelltransplantationforrepairofcartilagedefectsinosteoarthriticknees[J].OsteoarthritisCarti lage,2002,10(3):199~206.
- [8] 陈克明,葛宝丰,刘兴炎,等,骨髓间充质干细胞复合纤维蛋白凝胶修复大面积关节软骨缺损[J].中国矫形外科杂志,2004,12(6):444~446.
- [9]LeeK,MajumdarMK,BuyanerD,etal.Humanmesenchymalstemcellsmaintaintransgeneexpressionduringexpansionanddifferenti ation[J].MolTher,2001,3(6):857~866.
- [10]JiangY,JahagirdarBN,ReinhardtRL,etal,Pluripotencyofmesen chymalstemcellsderivedfromadultmarrow[J].Nature,2002,418(6893):41~49.
- [11] 戴刚,李起鸿,周强,等.细胞支架复合体构建及其异体移植修复关节软骨缺损的形态学观察[J].第三军医大学学报,2002,24(5):563~566.
- [12]QuintavallaJ,UzielFusiS,YinJ,etal.Fluorescentlylabeledmes enchymalstemcells(MSCs) maintainmultilineagepotentialandcanbedetectedfollowingimplantationintoarticularcartilagedefects[J].Biomaterials,2002,23(1):109~119.