中国矫形外科杂志

2008, No.214(20) 1568-1572

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重组BMP_(4/7)融合基因腺相关病毒的构建及其对兔骨髓基质干细胞生物学行为的影响
Construction of BMP_(4/7) fusion gene adeno-associated virus and biological effects of transfection on bone marrow stromal cells in rabbits

袁绍辉;尚剑;邵国军;刘玉耆;博超刚;

摘要(Abstract):

[目的]应用重组骨形成蛋白4/7融合基因腺相关病毒载体(AAV BMP4/7)转染兔骨髓基质干细胞(BMSCs),观察其对BMSCs生物学行为的影响。[方法](1)采用RT-PCR一步法和基因重组法,从胎盘组织中克隆BMP4和BMP7成熟肽cDNA,获取BMP4/7融合基因,克隆到质粒pGEM质粒中;(2)从pGEM-BMP4/7质粒中切取BMP4/7融合基因克隆到穿梭质粒,在大肠杆菌内重组,在293细胞中构建AAV-BMP4/7重组腺相关病毒载体;(3)不同MOI值的AAV-BMP4/7转染兔BMSCs,观察细胞形态学变化,MTT法描记细胞生物曲线,观察对细胞增殖的影响,以AAV-EDFP做对照;(4)AAV-BMP4/7转染兔BMSCs细胞7、14d后,行ALP及OC含量测定,观察成骨活性,以AAV-EDFP做对照。[结果](1)成功构建高滴度的携带BMP4/7融合基因的重组腺相关病毒AAV-BMP4/7;(2)AAV-BMP4/7转染BMSCs细胞后,细胞增殖活性良好,转染效率为72%,细胞形态呈典型的成骨改变,1×105vg/cell的MOI值对细胞形态影响较小,而转染效率强于5×104vg/cell(59.38%)。(3)AAV-BMP4/7转染细胞后,ALP、OC含量均明显增高,并与转染后诱导培养的时间呈正相关,与对照组比较差异统计学意义(tALP=896.88P<0.001tOC=543.24P<0.01)。[结论]AAV-BMP4/7融合基因转染效率高,对BMSCs细胞有明显的诱导成骨活性,对骨愈合的基因治疗提供了新的思路和途径。

关键词(KeyWords): 骨组织工程;骨形成蛋白;融合基因;腺相关病毒;骨髓基质干细胞

Abstract:

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基金项目(Foundation):

作者(Author): 袁绍辉;尚剑;邵国军;刘玉耆;博超刚;

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