中国矫形外科杂志

2013, v.21;No.338(24) 2515-2521

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VEGF基因转染对脂肪组织来源干细胞成骨定向分化潜能的影响分析
The analysis to effect of osteogenesis differentiation with adipose tissue-derived stem cells after transfected by vascular endothelial growth factor in vitro

刘兆杰;胡永成;

摘要(Abstract):

[目的]研究人血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)转染人脂肪组织来源干细胞(adipose tissue-derived stem cells,ADSCs)后对该细胞成骨分化能力的影响。[方法]采用Trizol法获取编码VEGF成熟肽的基因序列,将获得的目的基因与线性载体pGEM-T Easy连接,测序后与含绿色荧光蛋白的双顺反子表达载体双酶切连接成重组质粒pSELECT-GFP zeo-VEGF,并转染第2代ADSCs,荧光显微镜下观察转染效率。对转染后的ADSCs行成骨培养,Western Blot及Realtime PCR检测细胞对碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和骨钙蛋白(osteocalcin,OC)的分泌,分别对细胞行Von Kossa及ALP染色。[结果]荧光显微镜下可见与细胞形态相似的绿色荧光。成骨条件培养下,Western Blot及Realtime PCR检测结果示VEGF转染后的ADSCs组对ALP和OC的分泌量明显高于空载体转染组和空白细胞组,结果有统计学意义(P<0.01)。VEGF转染组细胞经Von Kossa及ALP染色可见不透光的钙结节沉着。[结论]经脂质体介导将人VEGF目的基因片段转染后的ADSCs成骨分化能力明显增强,转染后的ADSCs可以有效促进成骨,从而为基因治疗促进骨组织工程发展提供了必要的试验基础。

关键词(KeyWords): 血管内皮生长因子;脂肪组织;干细胞;转染;成骨细胞

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基金项目(Foundation):

作者(Author): 刘兆杰;胡永成;

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参考文献(References):

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