中国矫形外科杂志

2017, v.25;No.412(02) 152-157

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重组腺病毒介导的β-神经生长因子基因转染大鼠内皮祖细胞的实验研究
Rat endothelial progenitor cells transfected by recombinant adenovirus-mediated β-nerve growth factor: an experimental study

刘鹏;朱冬昀;彭长亮;马腾;吴东进;高春正;

摘要(Abstract):

[目的]探究携带β-神经生长因子(β-NGF)基因的重组腺病毒转染大鼠骨髓源内皮祖细胞(EPCs)的最佳感染复数(MOI),并从基因转录和蛋白合成两个水平上观察转染后EPCs对β-NGF基因的表达,探讨其对脊髓损伤后神经元细胞微环境的影响。[方法]密度梯度离心法分离、全骨髓贴壁法培养大鼠骨髓源EPCs,免疫荧光法检测EPCs特异性表面分子CD34、CD133和VEGFR-2的表达。用不同MOI值的携带β-NGF基因和绿色荧光蛋白基因(GFP)的重组腺病毒转染EPCs,确定最佳的MOI值。用携带β-NGF基因的重组腺病毒转染的细胞为β-NGF基因组,用空载的重组腺病毒转染的细胞为空载组,未转染的细胞为空白组。RT-PCR法、Western blot法和ELISA法检测β-NGF的表达。[结果]成功分离、培养出大鼠骨髓源EPCs,特异性表面分子CD34、CD133和VEGFR-2经鉴定呈阳性表达;携带β-NGF基因的重组腺病毒转染EPCs最佳的MOI为70;转染成功的细胞β-NGF基因在m RNA和蛋白两个不同的水平上表达都升高,并持续向细胞外分泌。[结论]携带β-NGF基因的重组腺病毒可成功转染EPCs,成功转染β-NGF基因的细胞能持续向细胞外分泌有活性的β-NGF蛋白。

关键词(KeyWords): 内皮祖细胞;神经生长因子;腺病毒;转染;感染复数;大鼠

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 山东省科技发展计划项目(编号:2014GSF118045)

作者(Author): 刘鹏;朱冬昀;彭长亮;马腾;吴东进;高春正;

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