中国矫形外科杂志

2010, v.18;No.246(04) 312-315

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携带人VEGF_(165)和ANG-1双基因的腺病毒载体的构建及目的基因的表达
Construction and target gene expression of recombinant adenovirus vectors containing vascular endothelial growth factor 165 and angiopoietin-1

张金康;孟国林;刘建;胡蕴玉;袁志;段春光;毕龙;白峰;黄鑫;禚文昆;李国臣;

摘要(Abstract):

[目的]构建并鉴定携带人血管内皮细胞生长因子165(VEGF165)和血管生成素-1(ANG-1)双基因共表达重组腺病毒载体pAd-VIA。[方法]采用基因克隆技术克隆目的基因VEGF165、ANG-1基因,将得到的基因通过引入内部核糖体进入位点序列(IRES),亚克隆至含有报告基因EGFP的穿梭载体pTrack-CMV中,构建携带双基因的腺病毒穿梭载体pTrack-CMV-VIA。进而使用AdEasyTM腺病毒系统重组并包装腺病毒。通过绿色荧光蛋白(GFP)表达、酶联免疫吸附分析(ELISA)方法检测制备的腺病毒pAd-VIA感染的大鼠骨髓基质干细胞中外源基因VEGF165及Ang-1的表达。[结果]该重组腺病毒质粒经测序、酶切鉴定,证明基因序列正确。转染QBI-293A细胞后,可观察到GFP明显表达。重组合腺病毒载体pAd-VIA获得成功包装,扩增后病毒滴度为2×1010PFU/ml,大鼠骨髓基质干细胞转染48 h后,绿色荧光蛋白表达阳性,ELISA结果显示转染组在感染48 h后,培养细胞上清中的VEGF165浓度为(42.5±2.082)ng/105细胞,ANG-1浓度为(16.67±2.08)ng/105细胞,未转染组几乎未检测到外源基因的表达,有统计学差异(P<0.05)。[结论]成功构建携带人VEGF165、ANG-1双基因共表达重组腺病毒载体,为组织工程人工骨血管化的研究奠定基础。

关键词(KeyWords): 血管内皮细胞生长因子165;血管生成素-1;腺病毒载体;基因转染

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金(编号:30672142)

作者(Author): 张金康;孟国林;刘建;胡蕴玉;袁志;段春光;毕龙;白峰;黄鑫;禚文昆;李国臣;

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参考文献(References):

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