中国矫形外科杂志

2004, (Z3)

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人成骨蛋白-1成熟肽在大肠杆菌中的克隆、表达和诱骨活性测定
Cloning,expression and determination of bone inductive activity of hOP-1 mature peptide in escherichia coli

王琦,葛宝丰,殷莹,白孟海

摘要(Abstract):

目的扩增、克隆人成骨蛋白1(humanosteogenicprotein1,hOP1)成熟肽cDNA基因,并利用大肠杆菌表达hOP1成熟肽。方法PCR扩增hOP1成熟肽cDNA基因,将其克隆入受控于含有PRPL启动子的温控型大肠杆菌表达载体pDH,构建成的重组质粒pDOPm以大肠杆菌DH5α为宿主菌进行温度诱导表达,表达产物纯化和复性后,以小鼠肌袋模型检测诱骨活性。结果扩增得到hOP1成熟肽基因;含重组质粒pDOPm的工程菌经42℃诱导后在SDSPAGE上出现一条新蛋白条带,分子量约为16ku,表达量占菌体总蛋白的21%,以包涵体形式存在,经纯化和复性处理,得到纯度高于85%、具有良好异位诱导成骨活性的hOP1成熟肽。结论成功克隆出hOP1成熟肽基因,并在大肠杆菌中得到高效表达,复性后具有诱骨活性。

关键词(KeyWords): 成骨蛋白-1;基因克隆;基因表达;大肠杆菌

Abstract:

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基金项目(Foundation):

作者(Author): 王琦,葛宝丰,殷莹,白孟海

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